学会誌「EICA」

[ノート] 琵琶湖水中におけるウイルス感染している細菌細胞のEM ステイナーを用いた電子染色条件の検討

内容

ウイルス感染している細菌細胞(VIC) の観察は微生物ループにおけるウイルスの寄与を評価する上で必要である。本研究では琵琶湖水中のVIC を透過型電子顕微鏡(TEM) で観察をすべく，酢酸ウラニルの代替電子染色剤としてEM ステイナーを適用し，染色条件を検討した。その結果，染色時間は30 分で十分に細胞内ウイルスを染色し，また染色剤濃度は1〜4 倍希釈でVIC のTEM画像に明確な違いがないことを明らかにした。また，TEM グリッドを長時間(30 秒×5 回) 洗浄すると細胞内ウイルスの画像が不鮮明になり，VIC の観察が困難になることが明らかとなった。

巻

22巻2/3号2017年

Page

27

題名

琵琶湖水中におけるウイルス感染している細菌細胞のEM ステイナーを用いた電子染色条件の検討

Title

Electron Staining using EM Stainer for detecting Viral Infected Bacterial Cells in a FreshWater Lake (Lake Biwa, Japan)

著者

沈　尚1)，日下部武敏2)，清水芳久1)

Authors

Shang SHEN 1), Taketoshi KUSAKABE 2) and Yoshihisa SHIMIZU 1)

著者表記

1)京都大学大学院工学研究科附属流域圏総合環境質研究センター，2)京都大学大学院工学研究科都市環境工学専攻

Author attribution

1) Research Center for Environmental Quality Management, Kyoto University, 2) Department of Environmental Engineering, Graduate School of Engineering, Kyoto University

著者勤務先名

Office name

著者所属名

キーワード

透過型電子顕微鏡(TEM)，EM ステイナー，電子染色剤，ウイルス感染している細菌細胞

Key Words

transmission electron microscopy, EM stainer, staining reagent, viral infected bacterial cells, viruses

概要

ウイルス感染している細菌細胞(VIC) の観察は微生物ループにおけるウイルスの寄与を評価する上で必要である。本研究では琵琶湖水中のVIC を透過型電子顕微鏡(TEM) で観察をすべく，酢酸ウラニルの代替電子染色剤としてEM ステイナーを適用し，染色条件を検討した。その結果，染色時間は30 分で十分に細胞内ウイルスを染色し，また染色剤濃度は1〜4 倍希釈でVIC のTEM画像に明確な違いがないことを明らかにした。また，TEM グリッドを長時間(30 秒×5 回) 洗浄すると細胞内ウイルスの画像が不鮮明になり，VIC の観察が困難になることが明らかとなった。

Abstract

Since the regulation of uranyl acetate severely restrict its use for scientific research, we examined an alternative stain (EM stainer ; gadolinium triacetate and samarium triacetate) for detecting intracellular viral particles in bacterial cells in Lake Biwa under a transmission electron microscopy. We found that 30 min was enough to stain intracellular viruses and 1〜4 x solution (final dil.) staining reagent did not affect to contrast of viral infected cells (VIC). In these staining conditions, intracellular viral images were clearly observed. We also found that longer washing process to remove excess stains worsened the viral images. The above results suggest that EM stainer can be useful as alternative to uranyl acetate for observing viral infected cells in fresh water lakes.